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第一章 冬虫夏草概况 1

一、什么是冬虫夏草 1

二、冬虫夏草的分布及资源 2

三、冬虫夏草菌的生活史 3

四、冬虫夏草菌的寄主昆虫 4

五、冬虫夏草相关真菌的开发利用 5

六、冬虫夏草的药理作用和化学成分 6

七、冬虫夏草的人工培育 7

八、采挖冬虫夏草对青藏高原生态环境的破坏 8

九、冬虫夏草研究中需要解决的问题 9

第二章 冬虫夏草菌株的分离和培养 11

一、冬虫夏草样品采集 11

二、冬虫夏草菌的组织分离技术 12

三、冬虫夏草菌单子囊孢子菌株的分离技术 12

四、培养物的鉴定 14

五、冬虫夏草菌子座的分化 15

六、讨论 15

第三章 冬虫夏草菌丝氨酸蛋白酶基因的克隆、表达及功能分析 16

一、冬虫夏草菌丝氨酸蛋白酶基因的扩增与分析 16

二、冬虫夏草菌丝氨酸蛋白酶基因在毕赤酵母中的表达 24

（一）表达载体的构建 24

（二）重组表达载体转化毕赤酵母和转化子的诱导表达 25

三、冬虫夏草菌丝氨酸蛋白酶的物理化学性质分析 27

（一）最适底物的确定 27

（二）最适温度和温度稳定性 27

（三）最适pH和pH稳定性 28

（四）金属离子对酶活性的影响 28

（五）抑制剂对酶活性的影响 30

（六）化学物质对酶活性的影响 30

四、冬虫夏草菌丝氨酸蛋白酶的生物测定 31

五、讨论 32

第四章 冬虫夏草菌交配型基因的克隆与分析 33

一、冬虫夏草菌交配型基因的扩增与分析 34

二、冬虫夏草菌MAT1-2-1上、下游序列的扩增与分析 39

三、利用MAT1-2-1特异引物对冬虫夏草菌样品的PCR扩增 40

四、MAT1-2-1的系统发育分析 42

五、讨论 42

（一）冬虫夏草菌交配型基因的扩增及交配方式的探讨 42

（二）交配型基因的组织结构 44

第五章 冬虫夏草菌的遗传分化 45

一、研究材料与基因扩增 46

二、冬虫夏草菌ITS和MAT1-2-1的序列变异 50

三、冬虫夏草菌的单元型 50

四、系统发育分析 52

五、种群遗传结构 55

六、通过PCR-SSCP分析ITS异质性 57

七、讨论 60

（一）冬虫夏草菌ITS序列的变异 60

（二）交配型基因用于真菌遗传多样性的分析 61

（三）冬虫夏草菌的起源与扩散 61

（四）冬虫夏草菌遗传分化研究的重要意义 62

第六章 冬虫夏草真菌群落的研究 63

一、真菌群落结构研究的策略 64

二、基于培养方法的冬虫夏草真菌群落结构研究 65

（一）形态鉴定结果 65

（二）基于分子序列的鉴定结果 67

（三）不同部位检测的OTU的比较 74

三、基于非培养方法的冬虫夏草真菌群落结构研究 75

（一）文库中冬虫夏草菌克隆与其他物种克隆的数量 75

（二）其他真菌克隆的多样性分析 76

（三）文库中优势OTU分析 86

四、培养方法与非培养方法研究结果的比较 87

五、讨论 88

（一）野生冬虫夏草外围的菌膜由冬虫夏草菌的菌丝体组成 88

（二）区分不同OTU的阈值 88

（三）培养法得到的真菌菌株与前人所报道真菌的比较 89

（四）SSCP方法与其他分析方法的比较 89

（五）冬虫夏草真菌群落研究的重要意义 91

参考文献 92

附录Ⅰ 本书作者发表的冬虫夏草相关的论文 101

附录Ⅱ csp1在GenBank中的登录序列 102

附录Ⅲ csp2在GenBank中的登录序列 105

附录Ⅳ MAT1-2-1及其旁侧序列在GenBank中的登录序列 108

后记 114

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